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關(guān)于支原體培養(yǎng)的相關(guān)知識
支原體定義:
支原體(mycoplasma)是一類沒有細(xì)胞壁、高度多形性、能通過濾菌器、可用人工培養(yǎng)基培養(yǎng)增殖的最小原核細(xì)胞型微生物。由于能形成絲狀與分枝形狀,故稱為支原體。支原體廣泛存在于人和動物體內(nèi),大多不致病,對人致病的支原體主要有肺炎支原體、溶脲脲原體、人型支原體、生殖器支原體等。
支原體結(jié)構(gòu):
支原體的大小為0.1~0.3um,可通過濾菌器,常給細(xì)胞培養(yǎng)工作帶來污染的麻煩。菌落?。ㄖ睆?.1-1.0mm),在固體培養(yǎng)基表面呈*的"油煎蛋"狀。無細(xì)胞壁,不能維持固定的形態(tài)而呈現(xiàn)多形性,對滲透壓敏感,對抑制細(xì)胞壁合成的抗生素不敏感。革蘭氏染色不易著色,故常用Giemsa染色法將其染成淡紫色。細(xì)胞膜中膽固醇含量較多,約占36%,對保持細(xì)胞膜的完整性具有一定作用。細(xì)胞膜含甾醇,比其他原核生物的膜更堅(jiān)韌。凡能作用于膽固醇的物質(zhì)均可引起支原體膜的破壞而使支原體死亡。
支原體基因組為一環(huán)狀以雙鏈DNA,分子量?。▋H有大腸桿菌的五分之一),合成與代謝很有限。
肺炎支原體的一端有一種特殊的末端結(jié)構(gòu)(terminal structure),能使支原體粘附于呼吸道粘膜上皮細(xì)胞表面,與致病性有關(guān)。
支原體分類:
一般能分解葡萄糖的支原體則不能利用精氨酸,能利用精氨酸的則不能分解葡萄糖,據(jù)此可將支原體分為兩類。解脲支原體不能利用葡萄糖或精氨酸,但可利用尿素作能源。
各種支原體都有特異的表面抗原結(jié)構(gòu),很少有交叉反應(yīng),具有型特異性。應(yīng)用生長抑制試驗(yàn)(Growth inhibition test,GIT)、代謝抑制試驗(yàn)(Metabolic inhibition test,MIT)等可鑒定支原抗原,進(jìn)行分型。
它廣泛分布于自然界,有80余種。與人類有關(guān)的支原體有肺炎支原體(M-pneumonie,Mp)、人型支原體(UU 分解尿素支原體)和生殖器支原體(M.genitalium,MG)等。
肺炎支原體引起肺炎。現(xiàn)已從人類泌尿生殖道分離出來7種支原體,其中分離率較高而與泌尿生殖道疾病有關(guān),是解脲支原體,其次是人型支原體。人型支原體(M.humenis,MH)、解脲支原體(Ureaplasma urealyticum,UU)和生殖器支原體(M.genitalium,MG)都會引起泌尿生殖道感染。
自然界中廣泛存在絕大多數(shù)生長需膽固醇,在遺傳上與細(xì)菌無關(guān),且無論在什么條件下也不能變成細(xì)菌菌落較小,0.1~0.3mm。
培養(yǎng)條件:
營養(yǎng)要求比一般細(xì)菌高,除基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)外還需加入10~20%人或動物血清以提供支原體所需的膽固醇。最適pH7.8~8.0之間,低于7.0則死亡,但解脲支原體最適pH6.0~6.5。
大多數(shù)兼性厭氧,有些菌株在初分離時加入5%CO2生長更好。生長緩慢,在瓊脂含量較少的固體培養(yǎng)基上孵育2~3天出現(xiàn)典型的“荷包蛋樣"菌落:圓形(直徑10~16um),核心部分較厚,向下長入培養(yǎng)基,周邊為一層薄的透明顆粒區(qū)。此外,支原體還能在雞胚絨毛尿囊膜或培養(yǎng)細(xì)胞中生長。